游離氨基酸是蛋白質中未結合的氨基酸,可以通過測定其含量來評估蛋白質的質量和純度。在游離氨基酸的測定中,通常需要使用空白溶液來作為對照,以確保測定結果的準確性。本文將介紹游離氨基酸的測定公式以及空白溶液的制備方法。

一、游離氨基酸的測定公式

1. 氨基酸測定法

氨基酸測定法是一種常見的測定游離氨基酸的方法,其原理是利用氨基酸測定試劑盒,將蛋白質樣品與試劑盒中的氨基酸反應,生成可檢測離子,然后通過檢測離子濃度來測定樣品中的氨基酸含量。

常用的氨基酸測定試劑盒包括氫氧化鈉(NaOH)、碳酸氫鈉(NaHCO3)、硫酸(SO4)2、磷酸二氫鉀(K2HPO4)和氯化鐵(FeCl3)等。其中,氫氧化鈉和碳酸氫鈉用于去離子化,硫酸和磷酸二氫鉀用于調節pH值,氯化鐵用于檢測氨基酸離子。

2. 空白溶液的制備

在氨基酸測定中,空白溶液是必不可少的。空白溶液是指未參與測定的溶液,用于防止干擾和保證測定結果的準確性。通常,空白溶液的制備方法是將空白樣品(通常是指水)進行稱量,然后將其倒入盛有一定量的氫氧化鈉和碳酸氫鈉的試劑瓶中,用氣球泵將其攪拌至完全溶解。最后,將試劑瓶進行清洗并晾干即可。

需要注意的是,制備空白溶液時應該控制好溶液的質量和濃度,以確保測定結果的準確性。一般來說,空白溶液的濃度應該盡量接近樣品中氨基酸的濃度,并且應該使用高質量的試劑,以避免因試劑質量差異導致測定結果的誤差。

二、空白溶液的作用

空白溶液的作用主要有以下幾點:

1. 防止干擾

在氨基酸測定中,樣品中的其他蛋白質、氨基酸和雜質可能會與試劑盒中的氨基酸反應,導致測定結果的誤差。因此,制備空白溶液可以有效地防止這種干擾。

2. 保證測定結果的準確性

空白溶液制備過程中,氫氧化鈉和碳酸氫鈉可以去除樣品中的離子,硫酸和磷酸二氫鉀可以調節pH值,氯化鐵可以檢測氨基酸離子,這些步驟都可以保證測定結果的準確性。